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做了十年的重组蛋白表达,来分享一些自己的感受吧

从学校毕业后就进入一家公司做重组蛋白表达工作,猛然间才发现,原来2008已经是十年前的事情了,自己也从原核细胞表达平台调到了HEK293稳定株及瞬时表达平台,期间还在杆状病毒-昆虫细胞表达平台、酵母细胞表达平台待过一段时间。可以说这十年时间,我的青春奉献给了重组蛋白的不同表达平台,所以接下来我就说一说这些平台的故事吧。

原核细胞表达平台是最常用的表达系统,经济实惠,可以表达一些无糖基化或者经过简单修饰的重组蛋白,但是有些特殊的表达载体难以与宿主菌相容,使得目的蛋白无法表达,还有就是经常出现包涵体,表达蛋白不可溶,在纯化过程中容易造成重组蛋白失活。当然为了克服这些问题,我们组要经常进行表达载体与菌株相容性测试、诱导表达条件优化、复性等试验,经过这十年的优化,我们积累了大量的经验,建立了完整的载体与最佳菌株相容库。我们还建立了2000L的大肠杆菌生产车间,可以实现工业化生产。

规模化的原核表达系统

CHO稳定株和HEK293瞬时表达平台的出现克服了翻译后修饰蛋白表达的问题。此平台表达的蛋白具备折叠和修饰的功能,高度人源化,可以用于结构、功能分析。表达量明显提高,使得大规模表达更加容易。稳定及瞬时表达平台,从细胞转染、筛选到分离,整个操作过程在无血清培养条件下完成,可以实现翻译后特殊修饰,形成多聚体,在多肽内或多肽间形成二硫键,或者进行特殊的糖基化。我们现在每天进行小规模的蛋白表达可以近千次,从100ml的细胞筛选到1L的表达条件构建不等。我们建立的高效稳定株、细胞系,可以进行大规模生产,从2L到200L培养体系的稳定运行,cGMP车间的100L到1000L的稳定表达。


哺乳动物细胞表达系统

杆状病毒-昆虫细胞表达平台操作流程简单、表达水平高,可以表达翻译后修饰的重组蛋白,可用于表达多种病毒蛋白、激酶蛋白等,尤其擅长进行定位于胞内、核内的重组蛋白表达。我们优化了sf9、sf21昆虫细胞的培养条件,自主研发了一套培养基,有效的提高重组蛋白表达量。

酵母细胞表达平台以毕赤酵母为表达载体,融合了原核表达与真核表达平台的优点,可以表达糖基化蛋白,表达量高且稳定。此平台可以表达一些在其他平台无法表达的蛋白。

多种细胞表达平台十年的蛋白表达经验,从原核到真核,从最初的瓶瓶罐罐到现在的不同规格的反应器,可以说我见证了重组蛋白从难表达到规模化制备的过程。看看我现在用的这些设备怎么样?他们可以用于蛋白浓度测定、吸收光谱检测、N末端序列测定、质谱分析等蛋白性质、功能等分析测定。

重组表达蛋白检测设备大家如果在重组蛋白方面有什么想法,可以在下方和义翘神州一起讨论。

作者: 义翘神州

北京义翘神州科技股份有限公司是一家从事生物试剂研发、生产、销售并提供技术服务的生物科技公司,主要业务包括重组蛋白、抗体、基因和培养基等产品,以及重组蛋白、抗体的开发和生物分析检测等服务,为全球的药品研发企业和生命科学研究机构提供高质量的生物试剂产品和高水平的技术服务。义翘神州的产品能够覆盖生命科学研究的多个领域,为分子生物学、细胞生物学、免疫学、发育生物学、干细胞研究等基础科研方向和创新药物研发提供“一站式”生物试剂产品和技术服务。



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