如何自己制备大肠杆菌感受态细胞

前几期文章中，我们了解到了大肠杆菌转化方法（戳这里）和常见大肠菌感受态细胞的用途（戳这里）。本期为大肠杆菌转化系列的最后一篇文章，我们来聊聊如何制备感受态细胞，用于基本的转化-克隆实验。

在市场上，商家出售各种高效感受态细胞，即各种特定改造过的大肠杆菌细胞，可用于不同目的的转化；但是，一直买感受态细胞是个很费钱的事儿。所以很多实验室/研究员都会自己制作感受态细胞，以降低实验成本。今天我们就来聊聊怎么做和要注意的事情。

HOW

• 制备100 mL 细胞悬浊液，培养基使用LB；

• 生长至OD（600）=0.4-0.5；

• 取出悬浊液置于冰上，同时各种接下来要用的容器也至于冰上；

• 4°C低速离心沉淀细胞获得细胞沉淀，1500g，10 min；

• 用10 mL TSS buffer 重新悬浊细胞沉淀，在冰上操作。

• 分装储存于-80°C，每100 uL一份。

TSS buffer：5g PEG-3350，1.5 mL 1M MgCl₂ ，2.5 mL DMSO，和LB培养基混合至50 mL，过滤灭菌后方可使用【1】

感受态细胞的转化效率可定义为每1 ug的DNA转化过后可形成菌落的数量。计算方法是数出转化后所得菌落数量，除以所用DNA的质量，计算结果的单位是colony number/ug。当转化效率可达到1×10⁶ colony/ug 或以上的时候，这样的感受态细胞可以胜任一般的分子克隆。所以如果自制的感受态细胞可以达到这个效率，也就没有必要从商家处持续购买成品细胞了，也是节省了不少的成本和时间。虽然制备过程十分简单，但并不容易可以制作出高效地细胞，有一些注意事项供大家参考。

TIPS

• 一定要用刚刚长出来的菌落制备细胞悬浊液；

• 用于培养细胞的容器一定清理干净并消毒，没用任何残留的去污剂或其他异物；

• 收集细胞时候的OD值一定要控制在0.5左右，不可过高；

• 冰上/4°C 环境十分重要，基本上整个过程有细胞出现的地方都要低温环境；

• 所有用来盛装细胞或溶液的容器也要先置于冰上冷却；

• 整个过程速度要快，但是对待细胞要温柔，减少使用移液枪抽取细胞悬浊液的次数。

自制感受态细胞十分简单，你会了吗？欢迎留言讨论。

【1】Chung CT, Miller RH (1993)Preparation and storage of competent Escherichia coli cells. Methods Enzymol. 218: 621-7.

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