無限大な夢のあとの
何もない世の中じゃ
仅以Butter-fly的一句歌词开始今天的文章，纪念去世的原唱，和田光司。小编并不是他的粉丝，只是数码宝贝主题曲，勾起了无限多的童年回忆，谁还没迷过一两部动画片呢^_^。时常想起进化、超进化的数码宝贝，和正义战胜邪恶的故事。
——————————这是分割线，好硬的转折>_<————————
PCR也是可以进化的
作为分子生物学最最基础也并不简单的实验过程，PCR让我们有机会扩增一段特定的DNA片段，有了分析单个基因的条件。PCR要发生非常简单：一个母板DNA，一个正向（上游）引物，一个反向（下游）引物，一种DNA复制酶，一堆dNTP作为复制原料，和适应酶工作的缓冲液环境，以及一个设置好的温度循环。但有时候现实中的PCR并不是这么简单就可以完成的，总会出现各种让人苦恼的问题。为了达到不同的扩增目的、提高扩增效率或是增加检测能力，各种以PCR为理论基础的进阶版PCR被使用。在本期文章中，小编先介绍一下各种进阶PCR的概念，后续文章我们再详细说说每种PCR的使用方法。
Colony PCR
菌落PCR，一个快捷验证质粒/特定基因片段是否存在于细菌中的方法。如果按照传统的分子生物学的步骤，我们想要验证一段基因已经成功克隆到细胞中，那么一般要经历养细胞>提取质粒>送测序/酶切验证等等这些步骤。但是这太费时间了，于是人们直接把菌落拿出来作为DNA母板，使用目标基因的正反向引物，进行PCR。在菌落PCR之前，重要一步是将菌落“煮熟”，否则细菌细胞内的有活性的蛋白质可能会影响到DNA复制酶的正常工作。小编经常用，效果还不错！
Hot start/cold finish PCR
改造过的DNA复制酶，只在高温环境下才会被激活，所以阻止了稍低温度下可能出现的非特异性扩增。
Nested PCR
巢式PCR，其实就是两轮PCR反应，其目的是提高最终目标片段的特异性扩增。不同于普通PCR，巢式PCR需要两对引物。第一对引物用于扩增包含目的片段的较长片段，这个较长片段就是所谓的巢，第二对引物用于扩增目的片段，原理如下图所示。通过第一轮PCR调高了“巢”片段的数量，相当于提高了第二轮PCR母板的纯净度，因此也更容易扩增目标片段。
Quantitative/Real-Time (q) PCR
这就是传说中的qPCR了，又叫即时PCR，简单来说就是，一边进行着正常的PCR反应，一边可以告诉我们到底有多少目标片段被复制出来了。荧光标记的扩增片段可以在每轮扩增后被定量检测出来，一次给我们一个准确的扩增总量。关于qPCR，我们有太多可以讨论和延伸的，比如如何设计引物，如何分析数据，这些我们以后再说咯~
Splicing by overlap (SOE) PCR
想把两段DNA片段连接起来，最简单最传统的方法是酶切-粘合的方法，除此以外还可以用PCR的方法，设计使两段DNA片段的末端拥有一小部分重合的序列，在进行正常的PCR反应的时候，两个片段可以互为引物，最终扩增成一条结合在一起的片段（具体内容见往期文章，把DNA变成乐高玩具，想怎么拼就怎么拼！）
Touchdown PCR （TDPCR）
Touchdown PCR又叫降落式PCR，降落的是退火温度（annealing temperature）。TDPCR的前几个循环拥有较高的退火温度，每个循环都降低一点，逐循环下降，直到降低至你设计的退火温度。在高退火温度的时候，会积累一些特异性产物，后期退火温度下降到适宜的位置，这些特异性产物的扩增效率会增加，因此减少了非特异性扩增。
有关进阶版的PCR，还有哪些，欢迎留言讨论哦！
图片来自网络，内容由BioEngX原创，转载请注明！
扫描下方二维码关注BioEngX官方微信公众平台
desloratadine 5mg over the counter – beclomethasone nasal spray buy ventolin pill
buy medrol generic – purchase claritin generic astelin 10ml cheap
purchase albuterol pills – buy generic allegra over the counter order generic theophylline 400mg
ivermectin 12mg for sale – eryc 250mg canada buy cefaclor for sale
cleocin 150mg us – purchase chloramphenicol generic chloramphenicol online order
zithromax 500mg uk – buy tetracycline without prescription ciplox 500mg without prescription
oral amoxicillin – order cefuroxime 500mg online buy baycip no prescription
augmentin 625mg brand – buy trimethoprim cheap cipro 500mg generic
hydroxyzine online buy – buy escitalopram online order endep 25mg pills
buy generic clomipramine – where to buy paroxetine without a prescription doxepin online
buy generic seroquel – fluvoxamine over the counter eskalith order online
buy clozapine 100mg online – ramipril 5mg uk pepcid tablet
buy generic zidovudine online – zyloprim 300mg pills
purchase glucophage generic – duricef pills lincomycin 500 mg without prescription
lasix cost – where to buy furosemide without a prescription purchase capoten online cheap
metronidazole brand – cheap amoxicillin tablets brand azithromycin 250mg
acillin tablet acillin us amoxicillin online buy
buy valtrex 1000mg pill – oral nemasole acyclovir 800mg cheap
ivermectin for humans walmart – co-amoxiclav ca sumycin 500mg drug
metronidazole 200mg tablet – buy flagyl 200mg azithromycin online buy
buy ciprofloxacin online – buy cheap generic keflex amoxiclav order online
cheap cipro – buy keflex 125mg online buy augmentin 625mg online cheap
purchase lipitor generic order atorvastatin online cheap lipitor 40mg for sale
请问Splicing by overlap (SOE) PCR 和Gibson assembly 的区别是什么呢？