DNA送测序，查找目标片段的存在和准确性，已经是分子生物实验中常见的不能再常见的步骤了。但总有那么一两次，我们送测序后得到的结果是非常低质量的。这里所谓的低质量，即指，测序长度过短、不确定碱基过多（各种N飞来飞去）、重复性低等等……这让满怀希望并且赶着实验进度的我们有苦说不出，当然我们自然可以要求测序公司进行重测，但有时候，我们再次拿到的结果往往还是低质量的。如果遇到此种情况，还是重新准备自己的质粒，拿新样本再送去测序吧~
那么问题到底出在哪里呢？为什么会得到低质量的测序结果，难道测序公司的机器还会有心情不好的时候，故意给你吐个差结果。多数（不是全部哦~）测序公司的测序设备是没有问题的，一般情况下跑一次测序就可以得到有质量的结果；那么最主要的问题应该出在我们送检的样本或者引物上。
BioEngX小编在这里总结了8点注意，供大家参考。如果能够做到这八点要求，应该可以保证每次得到高质量的测序结果。
1Miniprep不敷衍
如果我们送测序的样本是质粒，那么质粒的质量是关键，这也就牵扯到我们如何有效地提取质粒。一份可适用于测序的质粒样本应该是没有细胞基因组DNA，没有RNA，也没有多余的盐的！
值得庆幸的是，现在市面上出售的各种miniprep试剂盒，都有非常详细的操作说明，请一步一步明确按照指示来操作。该裂解4分钟的，千万别裂解10分钟；该离心几次，千万别少；洗出时该静置的，要静置……
想了解miniprep原理及具体操作方法，请戳这里：质粒提取，你不知道的事~
2干净的PCR样本
如果你送检的样本是PCR样本，那么记得纯化以后再送检。PCR反应残留液中的盐，会影响到后续测序结果的。
3样本质量大检查
我们自己能够做到的DNA样本质量检测无外乎两种：要么是紫外分光光度计测浓度；要么是琼脂糖胶分离样本看纯度。
紫外分光光度计，可以告诉我们样本DNA的浓度，如果波谱上同时出现非260nm波峰的话，证明有其他杂质（蛋白或其他，取决于峰的位置）。琼脂糖胶可以帮助分离样本中不同长度的DNA，如果质粒样本中有其他杂质DNA（如，基因组DNA），我们可以很清楚地从条带的高低看出来。万一样本中有大量杂质DNA，那只能重新提取质粒样本了。
4了解送检样本的要求
每个测序公司也许对样本的浓度和体积要求不一样，所以千万查看清楚，这家公司需要多少微升多少浓度的什么样本。如果你的原始样本浓度过高，请一定稀释后再送检。
5准确的引物
一般测序公司里会存储各种常见引物，比如T7F、M13R、SP6等等……但是每家公司的标准引物不一定完全一样。在送检前，请一定检查测序公司的引物序列具体是什么，是否和自己的送检DNA上的引物片段吻合。
如果是随样本送检的DIY引物，一般要满足以下几点要求：
- Tm保持在50-60 °C
- 避免二级结构和可能的自身配对联合
- 长度保持在18-24 bp
- 溶解于dH2O，并配到测序公司指定的浓度
- 引物重合位置应与目标片段起始位置相隔50 bp左右
6阳性对照
如果你有已经被测过序并且得到高质量结果的样本的话，可以把这个样本与其他未知样本同批次送检，这样就可以保证在那一批次的测序中有一个阳性对照（positive control）。这样我们就能清楚地知道测序机器是否正常工作。
7二次测序
当第一次测序得到了垃圾结果，我们可以要求测序公司再对自己的样本进行重新测序，很多公司对因不满意第一次测序而要求的再测序是不收费的，一定要选择有这种服务的公司。一旦第一次测序不成功，自己还有第二次机会，既然花了钱就要有最大的效果。
8多家公司，多个选择
如果自己的样本在同一家公司反复测得垃圾结果，而且自己的样本是确保没有问题的，那么换一家测序公司吧，你们八字不合，测不出来的~~~
这就是BioEngX小编认为，能获得高质量测序结果应该注意的8件事，欢迎各位关于测序的别的想法~在文末留言哦~
管理员邮箱：info@bioengx.org；管理员微信：bioengxadmin; 内容和图片来自网络。欢迎留言讨论哦，如需再转载，请联系管理员。
扫描下方二维码关注BioEngX官方微信公众平台
purchase terbinafine – fulvicin cost purchase grifulvin v generic
buy rybelsus 14mg online cheap – desmopressin us buy generic desmopressin
how to get glyburide without a prescription – cheap glucotrol buy forxiga 10 mg online cheap
buy cheap generic depo-medrol – depo-medrol buy online purchase azelastine generic
buy asthma pills onlin – order generic advair diskus inhalator order theophylline 400 mg sale
ivermectin 6 mg without prescription – cefaclor 500mg drug buy cefaclor 250mg capsules
clindamycin usa – doxycycline price order chloromycetin for sale
order zithromax 500mg – flagyl 400mg pills buy cheap generic ciplox
amoxicillin without prescription – duricef 500mg ca buy cipro sale
augmentin 375mg cost – trimethoprim us buy cheap cipro
hydroxyzine 10mg us – buspin without prescription order endep 10mg for sale
clomipramine 50mg uk – cost paroxetine 20mg sinequan cheap
generic clozaril 50mg – order amaryl 4mg pill buy pepcid paypal
brand retrovir 300mg – lamivudine 100mg uk buy allopurinol pills
buy metronidazole 400mg pill – cleocin uk azithromycin 500mg drug
buy ampicillin for sale oral vibra-tabs amoxicillin generic
valacyclovir online buy – order nateglinide 120 mg sale buy acyclovir without prescription
ivermectin 3 mg pills for humans – buy ciplox for sale purchase tetracycline
metronidazole order online – buy cefaclor tablets zithromax sale
ciplox 500mg tablet – order tinidazole 500mg online erythromycin 500mg tablet
order baycip online cheap – keflex online order augmentin online cheap
buy ciprofloxacin – order ethambutol 1000mg generic buy augmentin 1000mg for sale
atorvastatin 80mg uk purchase lipitor without prescription brand atorvastatin 80mg