浅谈：细胞培养之在细胞间里你要注意什么（前篇）

在上一篇文章中，我已经给各位读者简单的说了进入细胞间之前所需要做的事情。点击查看上篇文章。

现在，仔细想想，我们已经从二氧化碳培养箱里拿出了细胞，并且在倒置显微镜下观察了细胞的密度，形态，是否有污染等信息。让我们对自己的细胞有一个大体的印象。这一次，我在这里先说一下我们需要注意的几个操作步骤。

取出/放入细胞到CO2培养箱的步骤：

取出：给外门门缝喷70%酒精，打开外门，给内外门之间喷70%酒精，给要伸进培养箱里的收喷酒精，旋开内门的旋钮（速度慢），取出细胞，旋上内门的旋钮（速度慢），给内外门之间喷70%酒精，关闭内门，给外门门缝喷70%酒精，结束。

放入的具体过程和取出基本一样，重点是，放入的细胞培养瓶（皿）的外表面也要喷70%酒精。

注意：观察底下水槽内的水是否还有，里面加入的要求无菌，且个人建议加入水浴锅杀菌剂。

倒置显微镜的使用步骤：

取下塑料罩子（紫外灯有可能对显微镜不好），需要接触培养瓶的地方喷70%酒精，打开电源，旋亮灯（注意灯光不要太亮，其次不要把细胞长期放在等下因为温度等会对细胞有影响），放到4X物镜下，放上细胞瓶（皿），观察细胞的密度，形态，是否有污染等，记录在细胞培养瓶（皿）上，旋灭灯，关闭电源，需要接触培养瓶的地方喷70%酒精，盖上罩子。

生物安全柜的使用步骤：

（开始使用之前需要开紫外灯15分钟故进入细胞间后第一件事就是打开生物安全柜的紫外灯）

之后关闭紫外灯，打开风机到合适档位，打开日光灯，最后打开玻璃罩到合适的高度（手臂可以自由活动，且尽量小），给安全柜的操作部分喷70%酒精后用无菌纱布/纸擦干，点燃酒精灯，开始使用，结束使用，盖灭酒精灯，清理移液器等（用酒精），给安全柜的操作部分喷70%酒精后用无菌纱布/纸擦干，关闭玻璃罩，关闭日光灯，打开紫外灯。

注意：1.检查酒精灯，蠕动泵，等是否关闭，电动移液器是否充上电；2.重新检查酒精灯是否盖灭。

水浴锅的使用：

里面的水要是无菌的水，个人建议里面放入水浴锅杀菌剂（也不是很贵）确保无菌。

里面还要放一个杯子里面的水也要是无菌的，需要复温的试剂就放入杯子里（杯子里的水要经常换，最好也要放水浴锅杀菌剂），复温完成的试剂用纸擦干后喷70%酒精就能拿进安全柜了。

离心机的使用：

离心机需要注意配平，其次是内部的消毒，使用完后要用70%的酒精擦洗；使用的时候通常离心的转速时1000-1500转每分钟；注意拿出离心管的时候动作轻柔，防止已经沉淀的细胞重新悬浮。

在下一个期我会给大家具体讲解培养细胞的复苏，换液，传代（分瓶），冻存这些步骤，敬请期待。

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