师兄,为什么我的细胞培养液是紫红色?

实验室新来了一个师弟,老板让其从养细胞开始。这个小师弟是个夜猫子,总喜欢深夜做实验。一天早上:
小师弟: 湿胸,昨天传的细胞没贴壁,培养液变成紫红色的了。是不是你给我的那皿细胞是不好的?
科研狗:你操作没毛病?
小师弟:绝对没毛病,严格遵循你的指示。为了怕孵箱细胞太多,我特意单独放在另外一个孵箱里。
科研狗:等等,另外一个孵箱?没有接通CO2啊

今天我们来聊一聊培养液中的颜色,一般情况下,我们购买回来的DMEM培养基都是鲜红色的,如下图:

但是,作为老司机的你肯定也见过如下颜色的:

还有这样颜色的:

小师弟: 师兄,你见过赤橙黄露青蓝紫的吗?
科研狗:…

1. 为什么这个DMEM培养基是鲜红色的?
这个问题可以从如下两个方面来回答:
业余回答:
A. 它总要有一个颜色吧,如果是绿色的或者你会问他为什么是绿色的
B. 红色的看上去有食欲,细胞自然喜欢吃了。你想想,给你一堆绿了吧唧的水果和给你一堆鲜红的水果,你喜欢吃哪一种?

专业回答:
培养基的颜色主要是酚红来显示的,酚红指示颜色非常灵敏,p值范围为6-8,颜色由黄变为紫红。酚红不是必须的,在有些情况下甚至是多余的,酚红有类似固醇类激素的作用,如果涉及到固醇类激素相关的细胞培养,最好不要添加。但是为了培养方便,能让我们直观地感觉培养液的状况,加入酚红后,如果培养液偏酸了,就显示偏黄色,偏碱性了就显示偏紫色。

2. 为什么培养皿放在一个没有开启CO2的孵箱里面,培养液颜色偏紫色?
一般的DMEM使用的缓冲体系是NaHCO3, 初中的时候应该见过如下的方

2NaHCO3=Na2CO3+CO2+H2O

在没有CO2的孵箱中,培养液中的CO2一直溢出,碳酸变少了,溶液变碱性了,就偏紫色了。 同时我们打开了很久的DMEM瓶里面的培养液也会慢慢偏紫色,也就是这个道理。

3. 什么时候溶液会变为黄色?
这个简单,一般污染细菌的时候或者长时间不换液,溶液变为黄色主要是酸性物质太多,细菌和细胞过度增长都会产生酸性物质,溶液会变为黄色。

4. 培养基偏紫色了还能用不?
可以将该偏紫色的培养基置于CO2孵箱中,拧松瓶盖。一段时间之后你会发现颜色变为鲜红色了,那么可以继续接着用。但是不要使用过长时间未用完并且变色的培养液,置于空气下氧化之后培养基成分可能已发生了变化。

5. 哪些情况下不得使用酚红?
如前面所说的酚红有类似固醇类激素的作用,如果涉及到固醇类激素相关的细胞培养,不要添加。另外在做流式细胞的时候,酚红会对结果产生影响,因此也不要添加。

6. 有没有不受CO2影响的培养基?
有,如果缓冲体系不是NaHCO3,而是其他体系如HEPES,就不受CO2的影响。

7. 常用的培养基有哪些?
MEM(Minimum Essential Medium): 也称最低必须培养基,它仅含有12种必须氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。可以广泛应用到各种细胞培养。

DMEM:分为高糖和低糖,碳酸氢钠缓冲体系,所以需要CO2。
高糖的适合于高密度悬浮细胞培养,适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的细胞。 低糖的适合于生长速度较快,附着性较差的肿瘤细胞培养。

DMEM/F12:F12 培养基成分复杂,含有多种微量元素,和DMEM以1:1结合,称为DMEM/F12培养基(DME/F12medium),作为开发无血清配方的基础,以利用F12含有较丰富成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较条件下哺乳动物细胞培养。

RPMI-1640:主要用于悬浮细胞培养,广泛用于哺乳物,特殊造血细胞,正常或者恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞。 另外K-562, L-60、urkat、IM-9 等淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞也可以使用。

McCoy’s 5A : 主要用于肉瘤细胞的培养, 还可以用于骨髓、皮肤、肺等原代培养,用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。比如HT29,BHL100等上皮细胞。

IMDM(Iscove’s Modified Dulbecco Medium):主要用于红细胞和巨噬细胞前体培养。培养液中含有微量元素硒以及额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠以及HEPES。

M199 Medium 是具有确定化学成分的细胞培养液,主要用于鸡胚成纤维细胞培养,培养时必须辅助血清才能长期培养。

L-15(Leibovitz Medium) 适用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株,用于快速增值瘤细胞的培养。

Ham’s F-10: 适用于小鼠细胞以及人的二倍体细胞的培养

Ham’s F-12: 适用于单细胞培养或者克隆培养, 是无血清培养基中常用的基础培养基。

MCDB131: 适用于培养内皮细胞。

Opti-MEM I Reduced Serum Media: 适用于培养造血细胞。

作者: keyangou

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