做了十年的重组蛋白表达，来分享一些自己的感受吧

从学校毕业后就进入一家公司做重组蛋白表达工作，猛然间才发现，原来2008已经是十年前的事情了，自己也从原核细胞表达平台调到了HEK293稳定株及瞬时表达平台，期间还在杆状病毒-昆虫细胞表达平台、酵母细胞表达平台待过一段时间。可以说这十年时间，我的青春奉献给了重组蛋白的不同表达平台，所以接下来我就说一说这些平台的故事吧。

原核细胞表达平台是最常用的表达系统，经济实惠，可以表达一些无糖基化或者经过简单修饰的重组蛋白，但是有些特殊的表达载体难以与宿主菌相容，使得目的蛋白无法表达，还有就是经常出现包涵体，表达蛋白不可溶，在纯化过程中容易造成重组蛋白失活。当然为了克服这些问题，我们组要经常进行表达载体与菌株相容性测试、诱导表达条件优化、复性等试验，经过这十年的优化，我们积累了大量的经验，建立了完整的载体与最佳菌株相容库。我们还建立了2000L的大肠杆菌生产车间，可以实现工业化生产。

规模化的原核表达系统

CHO稳定株和HEK293瞬时表达平台的出现克服了翻译后修饰蛋白表达的问题。此平台表达的蛋白具备折叠和修饰的功能，高度人源化，可以用于结构、功能分析。表达量明显提高，使得大规模表达更加容易。稳定及瞬时表达平台，从细胞转染、筛选到分离，整个操作过程在无血清培养条件下完成，可以实现翻译后特殊修饰，形成多聚体，在多肽内或多肽间形成二硫键，或者进行特殊的糖基化。我们现在每天进行小规模的蛋白表达可以近千次，从100ml的细胞筛选到1L的表达条件构建不等。我们建立的高效稳定株、细胞系，可以进行大规模生产，从2L到200L培养体系的稳定运行，cGMP车间的100L到1000L的稳定表达。

哺乳动物细胞表达系统

杆状病毒-昆虫细胞表达平台操作流程简单、表达水平高，可以表达翻译后修饰的重组蛋白，可用于表达多种病毒蛋白、激酶蛋白等，尤其擅长进行定位于胞内、核内的重组蛋白表达。我们优化了sf9、sf21昆虫细胞的培养条件，自主研发了一套培养基，有效的提高重组蛋白表达量。

酵母细胞表达平台以毕赤酵母为表达载体，融合了原核表达与真核表达平台的优点，可以表达糖基化蛋白，表达量高且稳定。此平台可以表达一些在其他平台无法表达的蛋白。

多种细胞表达平台十年的蛋白表达经验，从原核到真核，从最初的瓶瓶罐罐到现在的不同规格的反应器，可以说我见证了重组蛋白从难表达到规模化制备的过程。看看我现在用的这些设备怎么样？他们可以用于蛋白浓度测定、吸收光谱检测、N末端序列测定、质谱分析等蛋白性质、功能等分析测定。

重组表达蛋白检测设备大家如果在重组蛋白方面有什么想法，可以在下方和义翘神州一起讨论。