您的位置 首页 DNA/RNA技术

质粒抽提实验方案

发布: 2019-07-16 6,737阅读 208评论

质粒抽提实验方案

质粒抽提实验流程：如图片所示

  1. 菌体收集

* 从选择培养基中挑取单克隆菌落，接种到含有适当浓度抗生素的2-5毫升LB培养液中，37°C条件下剧烈震荡（300 rpm）培养8小时。

* 将培养后的菌液按照1：500到1：1000的比例稀释至3 ml选择性LB培养基中，37°C条件下剧烈震荡（300 rpm）培养12–16小时。

* 6000 x g离心15分钟后收集菌体细胞，并尽可能去除上清。在0.1-0.5 ml的悬浮缓冲液（50 mm Tris-Cl，10 mm EDTA，100μg/ml RNase A，PH 8.0）中重新悬浮细菌颗粒，直到没有细胞团块。

  1. 细胞裂解

* 密封管中加入0.25毫升裂解缓冲液，用力翻转4-6次使其充分混匀，室温（15-25°C）条件下孵育5分钟，不要旋涡，否则会导致基因组DNA断裂。裂解后的菌液应该看起来呈粘稠状，注意裂解反应应控制在5分钟内。

  1. 中和反应

* 加入0.3ml中和缓冲液，用力翻转4-6次后置于冰上孵育5分钟。加入中和缓冲液后会形成絮状白色沉淀，使得混合物的粘性降低。沉淀出来的物质中包含基因组DNA、蛋白质、细胞碎片等。溶解液应充分混合，以确保十二烷基硫酸钾沉淀均匀。如果混合物仍然粘稠，则需要进一步的中和，以达到完全中和的效果。当悬浮液为均匀无色状态时，表明SDS已有效沉淀。

  1. 过柱

* 将上清液小心地转移至吸附柱并安装至收集管中，13,000 rpm离心1min。

* 若上清液较浑浊，则需进行第二次较短的离心，以避免将悬浮物或颗粒物质保留在吸附柱上。悬浮物（使样品显得浑浊）会堵塞吸附柱，减少或消除流量。

  1. 柱平衡

* 向放置于收集管中的吸附柱中添加0.7 ml的洗涤缓冲液，13,000 rpm离心10min。然后使用1 ml平衡缓冲液（750 mM氯化钠，50 mM氯化钾，pH7.0，15%异丙醇）进行平衡。

  1. 洗脱

* 用0.8 ml洗脱缓冲液（1.23 mNaCl，50 mM Tris-Cl，ph 8.5，15%v异丙醇）洗脱DNA，在1.5 ml或2 ml离心管中收集洗脱液。

* 通过向洗脱的DNA中添加0.7倍体积（0.56毫升/0.8毫升洗脱体积）的室温异丙醇沉淀DNA，≥10,000 rpm离心30min，去除上清。

* 1ml 70%乙醇洗涤DNA，10,000rpm离心10分钟，去除上清。用70%的乙醇去除沉淀盐，用更易挥发的乙醇代替异丙醇，使DNA更容易再溶解。

* 将吸附有质粒DNA的硅胶膜风干5-10分钟，然后在合适的缓冲液（例如，TE缓冲液，pH8.0或10mm tris-Hcl，pH8.5）中重新溶解DNA。

  1. 产量的测定

为了定量核酸浓度，在TE缓冲液中稀释质粒DNA 1:100或1:50（取决于质粒拷贝数），并在260 nm（A260）和280 nm（A280）处测定吸光度（光密度），使用TE缓冲液作为空白对照。此测量方法可使用公式直接计算核酸浓度：

[DNA] (μg/mL) = A260 × Dilution factor × 50

 

卡梅德生物科技（天津）有限公司真诚期待与您的合作！

330赞
标签:



相关文章

回复 Tcfhdt 取消回复

您的电子邮箱地址不会被公开。 必填项已用*标注

评论列表(208)

  1. Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: сервисные центры по ремонту техники в мск
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  8. תחת חשוף תחתונים תלויים על הברכיים וג ‘ ינס מונח בתחתית. התנשקנו…. לגמרי בתחת שלה. זה היה רושם בלתי נשכח של דירות דיסקרטיות. לא חוויתי check

    回复

  10. – אתה זה, סווטה. אולי מספיק! סלח לנו אם זה לא בסדר. מקס אמר בשלווה. – י-סאן, בסדר? – הוא נשם את נשימתו, שוב הפנה את ראשו לצדדים והמשיך: follow this post

    回复

  11. או: לא רצתה לתת אותה? במשך כמה דקות נאבקתי בכנות בפיתוי לבדוק את שאין לי זכות לשפוט אותה, כולם טובים וגברים ונשים. אז היא נלחמה עוד Hot independent escorts Tel Aviv beauties

    回复

  12. Мы предлагаем выбор из лучших моделей города, чтобы ты мог получать максимум от каждого момента. Почувствуй эту роскошь. Почувствуй Эскорт Москва.

    回复

  18. Привет, мужчины Омска! В вашем городе заработал новый сайт, который пообещал стать лучшим местом для досуга с девушками. Здесь много анкет с интересными личностями, и среди них вы обязательно найдете ту, что удивит вас своим очарованием https://night24-omsk.com/

    回复

  23. Доставка заказа СДЭКом за 1-3 дня. В розницу по оптовые ценам от производителя. Фабричное производство. Большой ассортимент из 1178 наименований в наличии: сигареты интернет магазин

    回复

  26. Портал Fact Store публикует самые свежие и актуальные новости Беларуси, России и мира ежедневно итолько для Вас https://factstore.ru/

    回复

  28. Приготовьтесь к новым приключениям с удивительными девушками Сочи на сайте знакомств 18+. Освежите свою жизнь контактами с привлекательными людьми, общайтесь и познакомьтесь с теми, кто сможет стать частью вашей жизни и принесет радость в ваше сердце: интим адлер

    回复

  29. Добро пожаловать на sofisimo.com, увлекательные материалы.
    Узнайте больше о sofisimo.com, актуальные темы.
    sofisimo.com – ключ к вашему развитию, ищите.
    Платформа sofisimo.com для всех, что-то интересное.
    Узнайте, как sofisimo.com может помочь вам, развивая.
    Станьте частью сообщества на sofisimo.com, делиться опытом.
    sofisimo.com предлагает уникальные идеи, новые подходы.
    Посетите sofisimo.com для открытия новых возможностей, новые навыки.
    Путешествие начинается на sofisimo.com, где.
    Погружение в sofisimo.com – ваш путь к успеху, выпускники.
    Так много возможностей на sofisimo.com, сможете открыть.
    Пользуйтесь ресурсами sofisimo.com каждый день, находить новые пути.
    Поговорите с нами на sofisimo.com, обсуждение.
    Выберите sofisimo.com для новизны, может.
    sofisimo.com – навигатор в мире информации, который.
    sofisimo.com – это ваша платформа, возможность для всех.
    sofisimo.com ждет вас, где.
    sofisimo.com – ваш путеводитель в мире знаний, каждый день новые открытия.
    sofisimo.com – платформа для инноваций, где.
    muebles elegantes [url=https://sofisimo.com/]https://sofisimo.com/[/url] .

    回复

  31. Откройте для себя мир ставок с 1xbet, присоединиться.

    Добро пожаловать в мир ставок с 1xbet, эксклюзивные бонусы.

    Уникальные бонусы от 1xbet, не упустите возможность.

    Скорее ставьте на свои любимые команды с 1xbet, от ставок.

    Лайв-ставки с 1xbet – это захватывающе, ваши шансы на выигрыш увеличиваются.

    1xbet предлагает широкую линейку ставок, свои стратегии.

    На 1xbet найдётся ставку для каждого, от спорта до киберспорта.

    1xbet дарит вам возможность следить за играми, наслаждайтесь просмотром.

    Быстрые выводы выигрышей с 1xbet, открывайте возможности.

    Обзоры и прогнозы на 1xbet, дайте себе преимущество.

    Ваши данные в безопасности с 1xbet, это важно.

    Не пропустите акционные предложения от 1xbet, максимизируйте свой выигрыш.

    Выигрывайте и наслаждайтесь с 1xbet, выберите правильный путь.

    Чат поддержки 24/7 на 1xbet, вы всегда не одни.

    1xbet – это не только ставки, но и конкурсы, примите участие.

    1xbet в вашем кармане, сделайте ставки на ходу.

    Ставьте на основе данных с 1xbet, анализируйте каждый шаг.

    Станьте частью 1xbet быстро и легко, доступ к азарту.

    1xbet – это ваше окно в мир ставок, реализуйте свои мечты.

    1xbet – это место для настоящих игроков, ставьте с умом.
    Keyword [url=https://1xbet-login-egypt.com/]Keyword[/url] .

    回复

  34. Эффективное продвижение сайтов, проверенные приемы.
    Секреты успешного продвижения сайтов, знания.
    Пошаговое руководство по SEO, трафик.
    Инновационные методы продвижения сайтов, которые изменят ваш бизнес.
    Углубляемся в продвижение сайтов, доступные каждому.
    Продвижение сайтов в 2025 году, которые принесут плоды.
    Топовые компании для онлайн-продвижения, которые помогут вам.
    14 ошибок при продвижении сайтов, чтобы не потерять трафик.
    Доступные методы SEO, узнайте.
    Топовые инструменты для анализа, которые обязательны к использованию.
    Показатели успешного SEO, чтобы добиться результата.
    Роль контента в SEO, что имеет значение.
    Как продвигать сайт на своем рынке, рекомендации профессионалов.
    Психология пользователей и SEO, основа успешного продвижения.
    Мобильное SEO: продвигайте сайт на устройствах, это важно.
    SEO против контекстной рекламы, по результатам выберите.
    Значение ссылочного продвижения, учтите это в стратегии.
    Изменения в мире продвижения, не пропустите.
    Как продвигать сайт в социальных сетях, получите новые целевые аудитории.
    Топовые практики по оптимизации, необходимые для успеха.
    реклама google [url=https://1prodvizhenie-sajtov-52.ru/]реклама google[/url] .

    回复
  42. Навесы на заказ в Ленинградской области说道：

    Собственное производство металлоконструкций. Если вас интересует Навесы в Лодейном Поле мы предлогаем изготовление под ключ монтаж навесов

    回复

  44. Надежные автозапчасти для вашего автомобиля, легко и удобно, Профессиональные автозапчасти, от надежных производителей, по выгодным условиям, по доступным ценам, в любом городе, Запчасти для вашего авто, все гениально просто, Широкий ассортимент автозапчастей, Ремонт без забот, отличное качество, по отличным ценам, с быстрой доставкой, с гарантией качества, Запчасти для вашего автомобиля, Надежные детали для вашего автомобиля, Лучшая цена на автозапчасти, Лучшие автозапчасти для вашего авто, удобная доставка, на любой вкус
    интернет магазин автозапчастей [url=https://mechamotive.com/]https://mechamotive.com/[/url] .

    回复

  45. Как выбрать платформу, которая не подведет, не обманет и принесет максимум прибыли? Мы проанализировали десятки криптобирж, сравнили их комиссии, безопасность, удобство и поддержку пользователей, чтобы вы могли торговать с уверенностью.
    Сколько вы уже потеряли из-за неправильного выбора биржи? Пора это исправить! Узнайте, какие платформы возглавляют рейтинг в 2025 году и почему именно они стали фаворитами миллионов трейдеров по всему миру. крипто биржи в россии рейтинг

    回复

  54. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали срочный сервисный центр asus, можете посмотреть на сайте: сервисный центр asus адреса
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  55. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали ремонт телевизоров xiaomi адреса, можете посмотреть на сайте: ремонт телевизоров xiaomi в москве
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  56. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали сервисный центр asus сервис, можете посмотреть на сайте: сервисный центр asus
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  57. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали ремонт телевизоров xiaomi в москве, можете посмотреть на сайте: ремонт телевизоров xiaomi
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  58. Ремонт телевизоров Xiaomi Москва说道：

    Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали ремонт телевизоров xiaomi рядом, можете посмотреть на сайте: ремонт телевизоров xiaomi сервис
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  65. Предлагаем услуги профессиональных инженеров офицальной мастерской.
    Еслли вы искали официальный сервисный центр xiaomi, можете посмотреть на сайте: официальный сервисный центр xiaomi
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  76. Профессиональный сервисный центр по ремонту сотовых телефонов в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт мобильных
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  77. Начните массовую индексацию ссылок в Google прямо cейчас!
    Быстрая индексация ссылок имеет ключевое значение для успеха вашего онлайн-бизнеса. Чем быстрее поисковые системы обнаружат и проиндексируют ваши ссылки, тем быстрее вы сможете привлечь новую аудиторию и повысить позиции вашего сайта в результатах поиска.
    Не теряйте времени! Начните пользоваться нашим сервисом для ускоренной индексации внешних ссылок в Google и Yandex. Зарегистрируйтесь сегодня и получите первые результаты уже завтра. Ваш успех в ваших руках!

    回复

  80. Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: сервис центры бытовой техники воронеж
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  86. Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: ремонт бытовой техники в волгограде
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  89. Ремонт автомагнитол в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту автомагнитол в Москве.
    Мы предлагаем: отремонтировать автомагнитолу
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  90. Профессиональный сервисный центр по ремонту сигвеев в Москве.
    Мы предлагаем: цены на ремонт сигвеев
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  91. Профессиональный сервисный центр по ремонту сетевых хранилищ в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт сетевых хранилищ с гарантией
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  94. Профессиональный сервисный центр по ремонту МФУ в Москве.
    Мы предлагаем: сервис по ремонту мфу
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  95. Ремонт посудомоечных машин в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту посудомоечных машин с выездом на дом в Москве.
    Мы предлагаем: замена помпы в посудомоечной машине стоимость
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  96. Профессиональный сервисный центр по ремонту моноблоков в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт моноблоков цена
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  97. Профессиональный сервисный центр по ремонту гироскутеров в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт гироскутера
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  98. Ремонт кондиционеров в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту кондиционеров в Москве.
    Мы предлагаем: стоимость ремонта кондиционера
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  100. ремонт ноутбуков apple в москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту компьютеров и ноутбуков в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт macbook m1
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  104. ремонт бытовой техники в ростове на дону说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем:сервисные центры в ростове на дону
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  108. [url=https://remont-kondicionerov-wik.ru]ремонт кондиционеров[/url]

    回复

  109. Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: ремонт крупногабаритной техники в перми
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  110. ремонт бытовой техники тюмень说道：

    Если вы искали где отремонтировать сломаную технику, обратите внимание – [url=https://tyumen.profi-teh-remont.ru]ремонт цифровой техники тюмень[/url]

    回复

  111. Профессиональный сервисный центр по ремонту кнаручных часов от советских до швейцарских в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт часов
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  112. Профессиональный сервисный центр по ремонту мониторов в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт монитора на дому
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  114. ремонт техники в нижнем новгороде说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: сервисные центры по ремонту техники в нижнем новгороде
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  115. Ремонт камер видео наблюдения в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту камер видео наблюдения по Москве.
    Мы предлагаем: ремонт камер наблюдения
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复
  116. Ремонт системных блоков в Москве说道：

    Профессиональный сервисный центр по ремонту компьютероной техники в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт компьютеров срочно
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  117. <a href=”https://remont-kondicionerov-wik.ru”>надежный сервис ремонта кондиционеров</a>

    回复

  118. Профессиональный сервисный центр по ремонту компьютерных блоков питания в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт блоков питания москва
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  119. Хочу поделиться опытом покупки в одном интернет-магазине сантехники. Решил обновить ванную комнату и искал место, где можно найти широкий выбор раковин и ванн. Этот магазин приятно удивил своим ассортиментом и сервисом. Там есть всё: от классических чугунных ванн до современных акриловых моделей.

    Если вам нужна раковина размеры , то это точно туда. Цены конкурентные, а качество товаров подтверждено сертификатами. Консультанты помогли с выбором, ответили на все вопросы. Доставка пришла вовремя, и установка прошла без проблем. Остался очень доволен покупкой и сервисом.

    回复

  120. Профессиональный сервисный центр по ремонту фото техники от зеркальных до цифровых фотоаппаратов.
    Мы предлагаем: ремонт проекторов в москве
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  121. Профессиональный сервисный центр по ремонту компьютероной техники в Москве.
    Мы предлагаем: диагностика системного блока компьютера
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  122. Профессиональный сервисный центр по ремонту фототехники в Москве.
    Мы предлагаем: ремонт фотовспышек с гарантией
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!
    Подробнее на сайте сервисного центра remont-vspyshek-realm.ru

    回复

  127. Профессиональный сервисный центр по ремонту бытовой техники с выездом на дом.
    Мы предлагаем: сервис центры бытовой техники москва
    Наши мастера оперативно устранят неисправности вашего устройства в сервисе или с выездом на дом!

    回复

  186. Wow, awesome weblog structure! How lengthy have you ever been running a blog for?
    you made running a blog look easy. The full glance of your site is magnificent, let alone
    the content! You can see similar here sklep internetowy

    回复
联系我们

联系我们

(44)07934433023

在线咨询: QQ交谈

邮箱: info@bioengx.org

关注微信
微信扫一扫关注我们

微信扫一扫关注我们

关注微博
返回顶部