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只需一步就可以获得近天然高活性的重组蛋白

发布: 2018-02-01 601阅读 68评论

还在为表达蛋白折叠、翻译后修饰的蛋白烦恼吗？还在为蛋白结构-功能分析难以合成合适的重组蛋白而发愁吗？还在为重组蛋白的结构与天然蛋白差异大而苦恼吗？还在为重组蛋白的活性低而郁闷吗？其实这些问题能够一步解决，就是选择哺乳动物表达系统即可解决。CHO和HEK293细胞稳定株及瞬时表达系统，可以实现低内毒素、高活性蛋白的表达。系统表达的重组蛋白可以翻译后修饰、蛋白折叠，结构更接近天然蛋白。

CHO及HEK293细胞稳定株及瞬时表达系统，表达水平高，可以平行开展近千个的细胞株筛选或表达分子靶点筛选实验，具有高通量高效率的特点。此系统细胞系已失去细胞接触抑制和锚地依赖特征，容易实现大规模培养。细胞遗传性状稳定，易于标记，分裂周期短，易于控制。在安全性方面，不会合成或分泌致病物质。

CHO稳定株及瞬时表达系统，遗传背景清楚，代谢稳定。与人的亲缘关系较近，外源蛋白修饰准确，可以准确的转录后修饰，使表达的糖基化蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面更接近于天然蛋白分子。CHO细胞系统可以让重组基因高效扩增和表达，产物胞外分泌，易于纯化。CHO细胞可以贴壁生长也可以悬浮培养，而自身分泌的内源蛋白较少，更加有利于外源蛋白的分离纯化。

HEK293细胞是由人胚肾细胞转入腺病毒5型DNA改造而来，能够增强CMV启动子后的外源基因的转录功能，实现高效表达。改造后的HEK293细胞可以作为反式调控子促进含有oriP元件的扩增，使其在细胞中的拷贝数增加，瞬时转染的表达量提高。HEK293细胞来源于人类，在临床实验方面更有优势，很多人源化治疗性重组蛋白表达首选此系统。HEK293瞬时转染系统表达的蛋白可以实现更复杂的翻译后修饰和糖基化，人源化程度更高，容易实现大规模生产。

虽然CHO和HEK293细胞稳定株及瞬时表达系统，在重组蛋白表达方面具有很大的优势，但是存在细胞培养成本高，培养条件难掌握，易污染等不足，在一定程度上影响了其应用的广泛性。而想要获得高效表达、翻译后修饰、人源化程度高的重组蛋白，这一系统却是首选。因此，很多有这些需求的科研人员会选择找一个可以提供此类技术服务的厂家来进行重组蛋白表达。那么要选择什么样的厂家才能既不耽误科研进度，还可以节约科研经费呢？

首先重组蛋白表达经验要丰富，比如十年以上的CHO和HEK293细胞稳定株及瞬时表达基础，近7000个分子靶点的表达经验，从基因构建到蛋白纯化的一站式服务。其次就要考虑重组蛋白表达的周期，比如2-3周完成一个蛋白的表达纯化，可以同时开展近千种的小规模平行试验。还有就是要考虑生产规模，能否实现从100ml的小规模筛选实验到1L培养条件优化，再到2-200L不同规模的反应器表达规模，甚至是500-1000L大规模的生产制备，因为大规模制备可以保证批次间的稳定性高，蛋白内毒素含量更低。

关于CHO和HEK293细胞稳定株及瞬时表达系统，你还有哪些方面的认识呢？

欢迎大家在下方的讨论区和义翘神州一起讨论。

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