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浅谈:细胞培养之在细胞间里你要注意什么(前篇)

在上一篇文章中,我已经给各位读者简单的说了进入细胞间之前所需要做的事情。点击查看上篇文章

现在,仔细想想,我们已经从二氧化碳培养箱里拿出了细胞,并且在倒置显微镜下观察了细胞的密度,形态,是否有污染等信息。让我们对自己的细胞有一个大体的印象。这一次,我在这里先说一下我们需要注意的几个操作步骤。

取出/放入细胞到CO2培养箱的步骤:

取出:给外门门缝喷70%酒精,打开外门,给内外门之间喷70%酒精,给要伸进培养箱里的收喷酒精,旋开内门的旋钮(速度慢),取出细胞,旋上内门的旋钮(速度慢),给内外门之间喷70%酒精,关闭内门,给外门门缝喷70%酒精,结束。

放入的具体过程和取出基本一样,重点是,放入的细胞培养瓶(皿)的外表面也要喷70%酒精。

注意:观察底下水槽内的水是否还有,里面加入的要求无菌,且个人建议加入水浴锅杀菌剂。

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倒置显微镜的使用步骤:

取下塑料罩子(紫外灯有可能对显微镜不好),需要接触培养瓶的地方喷70%酒精,打开电源,旋亮灯(注意灯光不要太亮,其次不要把细胞长期放在等下因为温度等会对细胞有影响),放到4X物镜下,放上细胞瓶(皿),观察细胞的密度,形态,是否有污染等,记录在细胞培养瓶(皿)上,旋灭灯,关闭电源,需要接触培养瓶的地方喷70%酒精,盖上罩子。

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生物安全柜的使用步骤:

(开始使用之前需要开紫外灯15分钟故进入细胞间后第一件事就是打开生物安全柜的紫外灯)

之后关闭紫外灯,打开风机到合适档位,打开日光灯,最后打开玻璃罩到合适的高度(手臂可以自由活动,且尽量小),给安全柜的操作部分喷70%酒精后用无菌纱布/纸擦干,点燃酒精灯,开始使用,结束使用,盖灭酒精灯,清理移液器等(用酒精),给安全柜的操作部分喷70%酒精后用无菌纱布/纸擦干,关闭玻璃罩,关闭日光灯,打开紫外灯。

注意:1.检查酒精灯,蠕动泵,等是否关闭,电动移液器是否充上电;2.重新检查酒精灯是否盖灭。

水浴锅的使用:

里面的水要是无菌的水,个人建议里面放入水浴锅杀菌剂(也不是很贵)确保无菌。

里面还要放一个杯子里面的水也要是无菌的,需要复温的试剂就放入杯子里(杯子里的水要经常换,最好也要放水浴锅杀菌剂),复温完成的试剂用纸擦干后喷70%酒精就能拿进安全柜了。

离心机的使用:

离心机需要注意配平,其次是内部的消毒,使用完后要用70%的酒精擦洗;使用的时候通常离心的转速时1000-1500转每分钟;注意拿出离心管的时候动作轻柔,防止已经沉淀的细胞重新悬浮。

在下一个期我会给大家具体讲解培养细胞的复苏,换液,传代(分瓶),冻存这些步骤,敬请期待。

图片来自网络,内容由作者原创,转载请注明!


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作者: GuanlinGuo

西安文理学院(Xi'an University)本科在读。曾任西安文理学院基因工程实验室助理,建立细胞培养实验室SOP,SPF动物屏障系统SOP并拥有Charles River亚洲短期培训证书,陕西省动物从业人员资格证书。目前负责实验室SPF的动物屏障系统运营及NPG MICE 肿瘤模型构建。研究方向;小分子药物的抗肿瘤,天然产物提取物的抗炎活性,TCR-T的白血病治疗研究(目前),探针的动物体内及体外荧光活性(学科交叉)。



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