在分子克隆里,大家不要小看了切胶回收(gel extraction)这一步骤,过低的DNA浓度和质量往往会直接影响后续实验的成功与否。为了避免这种不必要的事情发生,小编在此总结了一些切胶回收时的注意事项,希望能够帮助到大家。
-
电泳的缓冲液 (runningbuffer) 和胶(gel) 都应该是新做的,切胶的台子也要用乙醇清理干净。最好使用一次性切胶刀片,或是将刀片洗净灭菌。不要觉得小题大做,这样才可以保证切下的DNA目的条带没有外源DNA的污染。
-
切胶就是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收,所以大家通常都是在条带四周划掉,然后回收。但是不要忘了胶的厚度,正面切完还要把胶立起来,再尽量切掉前后多余的部分。为了减少胶的体积,大家也可以用相对比较薄的胶来做,薄而宽的梳子来弥补点样体积不够的问题。
-
减少紫外线(UV light)对胶的照射时间。如果要同时切几个目的条带的话,大家可以先把胶在日光灯下分开,然后放在紫外光下逐个切掉。通常紫外光有两个波长可以选择,建议大家选择波长较长的,可以相对减少对DNA的损伤。
-
根据小编的个人经验,如果操作熟练,UV曝光时间短的话,DNA的序列不会发生任何变化。但是如果你还是不放心的话,也可以考虑买肉眼可见的染色剂,例如结晶紫(crystal violet)或亚甲蓝(methylene blue)。但是这些染剂与DNA的结合能力相对比较低,敏感度差,所以只能显示出大约0.5µg以上的DNA。如此一来,DNA marker就很难被染色,也就不能判断、确定目标条带的位置。在这种情况下,大家可以先跑胶,将有DNAmarker的一部分切开放到更强的染色剂里(Ethidium bromide, GelRed等),另一部分带有目的条带的放在“安全”染剂里,确定好位置,再进行切胶回收。
-
如果大家觉得第4条的方法有些麻烦,还想回归简单的切胶,那么也可以考虑使用一些小技巧来加快切胶的速度。例如,Gene Catcher Tips就是一个新兴的小工具,放在pipette上一吸就可以轻松把胶切下来。大家看下图就自然明白了。小编自己还没有机会尝试,也欢迎大家分享使用心得。
-
相信大多数的人都在使用一些商用的gel extraction kit来回收胶。除了要遵循实验手册,大家还需要用多花一点心思来保证DNA的质量和产量。即使实验手册里没说,也可以多加一步清洗膜的步骤(washing step),这样可以进一步去除膜上离液盐的残留物(chaotropic salt residue)。否则这些残留物会影响接下来实验中连接酶(ligase)的效率。用乙醇清洗的时候,记得等到乙醇全部挥发之后,再进行洗脱(elution)。想知道乙醇是否污染了样品也很简单,可以尝试重新在胶上点样,如果在加入了loading dye之后,样品还是浮起来了,证明有乙醇污染。
图片来自网络,内容由BioEngX原创,转载请注明!
crestor pills div – zetia buy wrench caduet online whose
zocor choice – tricor conclude lipitor ask
buy nitroglycerin sale – how to get nitroglycerin without a prescription order diovan 160mg online cheap
buy cheap microzide – brand hydrochlorothiazide buy bisoprolol 10mg
heart attack prevention medication – lopressor 50mg cost nifedipine 30mg tablet
buy digoxin without prescription – trandate price furosemide online
ketoconazole pill – mentax cheap buy itraconazole 100 mg generic
famvir 250mg generic – valcivir ca valcivir pills
XcgDrVGZFHzvSA
terbinafine oral – buy generic forcan online how to buy grifulvin v
order generic rybelsus 14mg – semaglutide 14mg pill cheap desmopressin
buy metformin 1000mg online cheap – januvia 100mg cheap buy acarbose online
buy glyburide 2.5mg pills – order actos pill order dapagliflozin 10 mg pills
how to buy desloratadine – buy generic beclomethasone online buy ventolin 2mg generic
order generic medrol – purchase fluorometholone sale buy azelastine 10 ml
ivermectin 12mg tablet – doxycycline brand cost cefaclor 250mg
order cleocin sale – cefpodoxime order buy chloromycetin medication
buy generic zithromax 500mg – generic ciplox 500mg oral ciprofloxacin
buy cheap amoxil – buy duricef without a prescription cipro 1000mg us
augmentin 625mg us – zyvox 600mg uk baycip ca
buy seroquel 50mg generic – eskalith pills eskalith price
purchase clomipramine pills – cheap citalopram buy sinequan without prescription
buy zidovudine – order metformin 500mg for sale cheap zyloprim 300mg
buy generic clozapine over the counter – generic ramipril 5mg pepcid 40mg pills
order glycomet 1000mg for sale – buy generic glucophage 1000mg lincomycin 500mg cheap
oral furosemide 40mg – buy capoten generic order capoten
flagyl 200mg pills – cost amoxicillin zithromax online
acillin for sale ampicillin cheap amoxicillin price
valacyclovir generic – valacyclovir over the counter purchase acyclovir online cheap
UlgbEYLonxc
buy ivermectin 6mg online – buy aczone gel for sale how to buy tetracycline
metronidazole 400mg generic – buy amoxil generic buy azithromycin 250mg pills
ciprofloxacin 500 mg drug – order amoxicillin 500mg generic
buy erythromycin 250mg without prescription
cipro 1000mg uk – order amoxiclav generic how to get augmentin without a prescription
generic cipro – order bactrim 480mg generic buy augmentin pills
buy lipitor 10mg online cheap atorvastatin 40mg canada purchase atorvastatin online cheap
tXpmRAEicv
EJFafzrmgI