相信很多同学还在纠结如何优化蛋白质印迹法（Western Blot, WB）的操作方法（protocol），那么其中一个需要注意的细节就在于转渍（transfer）前要平衡转渍膜（equilibrate the membrane）。但不少人会有所疑虑，这看起来无关紧要的一步，到底需不需要做呢？小编之前也有相同的疑虑，做了很多回WB，都没有提前平衡转渍膜。但是后来发现这小小一步竟然是有很大影响的。今儿小编就给大家简单讲讲什么是平衡膜和三个需要它的原因。
在WB中，平衡膜这个步骤指的是用转渍缓冲液（transfer buffer）浸泡转渍膜和/或凝胶至少五分钟。要注意的是，这个步骤和最开始的膜激活（activation of membrane）是不同而且不冲突的。平衡膜是在跑完电泳（gel electrophoresis）后和转渍前的一步。
看上去非常简单，那么它的作用是什么呢？
1它能除掉电泳缓冲液中的污染盐 （contaminating electrophoresis buffer salts）
这些盐会增加转渍缓冲液的导电性（conductivity），从而增加了整个转渍系统的热量产生。如果你用PVDF膜的话就更需要小心了，因为它对十二烷基硫酸钠（SDS）的浓度很敏感。SDS浓度太高的话会抑制蛋白的结合能力，甚至让已经结合的蛋白脱落。
2它可以让你的凝胶在转渍前收缩到不会变的大小（shrink to its final size）
这个需要考虑两个方面：其一，转渍系统中产生的热量会让凝胶膨胀扩大；其二，聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel）通常会在含有甲醇的溶液里收缩（大部分转渍液都用甲醇！）。因此，可以提前冷藏转渍液并且把凝胶浸泡在转渍液里至少五分钟。但是如果你的目标蛋白很小的话，要确保平衡凝胶少于五分钟，否则分子量较小的蛋白就会从凝胶中扩散（diffuse）到溶液中。
3它可以防止凝胶和转渍膜变干
如果你正好有别的实验要忙，那不妨把凝胶和转渍膜浸泡在转渍液里等待一下，这样可以很好的安排别的时间。根据网上经验，使用PVDF膜和半干转渍系统转移高分子量的蛋白，浸泡两个小时是不影响转渍效率的。但注意这只适用于分子量比较大的目标蛋白。而且如果你有所怀疑的话，还是不要等太久。
所以到底要不要平衡呢？其实还是取决于你的转渍系统：
湿转渍（Wet transfer）: 需要！
半干转渍（Semi-dry transfer）: 需要！
快速真空转渍（Rapid vacuum transfer）: 不需要! 这样的系统不需要电流回路，所以污染盐不会影响。而且转渍很快，凝胶也不会收缩。
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